2.3.1窖泥微生物样本DNA的提取

采用DNA提取试剂盒对样本的基因组DNA进行提取，之后利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA的纯度和浓度[4]。取适量的样品于离心管中，以稀释后的基因组DNA为模板，根据测序区域的选择，使用带bar code的特异引物，Takara公司的Takara Ex Taq高保真酶进行PCR，确保扩增效率和准确性[5]。细菌多样性鉴定对应区域：16S区（引物343F和798R）；真菌18S多样性鉴定对应区域：18S（引物817F和1196R）；真菌ITS多样性鉴定对应区域：ITS（引物ITS1F和ITS2R）。最后利用的V3V4前端引物为：343F-5'-TACGGRAGGCAGCAG-3'；后端引物为：798R-5'-AGGGTATCTAATCCT-3'（该引物的合成是由上海欧易生物科技有限公司完成）。

2.3.2 PCR扩增与建库

PCR产物使用电泳检测，检测后使用磁珠纯化，纯化后作为二轮PCR模板，并进行二轮PCR扩增，并再次使用电泳检测，检测后使用磁珠纯化，纯化后对PCR产物进行Qubit定量[6]。根据PCR产物浓度进行等量混样，并上机测序。