1.1 深海细菌EPS体外神经保护活性筛选

细胞内时时刻刻发生着氧化还原过程，不可避免地产生活性氧，如超氧阴离子、羟基自由基、过氧化氢等^[33]。这些活性氧诱导氧化应激，导致线粒体、蛋白质、DNA和脂膜功能障碍，最终破坏细胞功能和完整性。H₂O₂可诱导多种细胞凋亡，并作为活性氧的前体。此外，H₂O₂容易在细胞和组织中扩散。所以，H₂O₂可以作为损伤剂应用于评价先导化合物的神经保护活性。实验结果表明，浓度范围在50-200 μM的H₂O₂可损伤SH-SY5Y细胞，IC50剂量浓度在100 μM-125 μM范围内（图 1A），为避免过度损伤，设定100 μM H₂O₂为模型组剂量。图 1B表明，EPS在800 μg/mL的浓度下，MTT法检测细胞活力均高于70%。据标准ISO10993-5所述，细胞活力不低于70%，可视为没有细胞毒性。因此，EPS在0-800 μg/mL时无明显细胞毒性。EPS体外孵育2 h后，给予100 μM H₂O₂损伤。同对照组相比，仅给予H₂O₂作为氧化损伤模型组（Neg），给予EPS和H₂O₂作为实验组。我们从南海北部海域共分离培养得到97种菌株，分别培养发酵获得EPS，经试验确定，其中共有16种EPS（编号为4、20、24、31、38、40、52、63、64、68、73、76、78、89、90、92，表 2）在剂量浓度为800 μg/mL时能够使得氧化损伤后的细胞活力大于90%，表明具有显著的神经保护活性（图 1C）。其中，编号为24、68、89、90的EPS活性最为显著。