1.3.2 紫苏饼粕蛋白提取工艺流程
脱脂紫苏饼粕→加水搅拌→10%氢氧化钠溶液调节pH值→加热提取→3000r/min离心20min→收集上清液→15%盐酸调节pH值至等电点→3000r/min离心20min→收集沉淀物→真空低温干燥→粉碎,过60目筛→粗提紫苏饼粕蛋白。
1.3.2 试验方法
1.3.2.1 基本组成成分的测定
水分,采用GB/T 10358-2008[21]的恒重法测定;粗脂肪,采用GB/T 6433-2006[22]的索氏抽提法测定;粗蛋白,采用GB 5009.5-2016[23]的凯氏定氮法测定;灰分,采用GB 5009.4-2016[24]的灼烧重量法测定。
1.3.2.2 可溶性蛋白质的测定
采用考马斯亮蓝法(Bradford法),依据在酸性溶液中考马斯亮蓝G-250与蛋白质分子中的碱性氨基酸(精氨酸)和芳香族氨基酸结合形成蓝色复合物,在一定线性范围内其颜色深浅与蛋白质浓度呈正比。
(1)标准曲线的绘制:根据试剂盒操作说明,取0、10、20、30、40、50、60μL BSA蛋白标准溶液(1mg/mL)于5mL离心管中,加入PBS补足到150μL后,加入2.85mL考马斯亮蓝染液,混匀,室温放置5-10min,于595nm测定吸光值OD值。以OD值对BSA蛋白浓度作图,得BSA蛋白标准曲线。