2.4.2 样品总磷含量的测定

取磷酸化修饰后的红枣多糖30 mg，于600℃下灰化2 h，用0.5 mL盐酸溶液（50%，V:V）对灰化残渣进行溶解，再转移至10 mL容量瓶，用蒸馏水定容^[10]，测定时需要稀释到适当的浓度。准确吸取稀释后的样品溶液2.00 mL及等量的蒸馏水，分别置于25 mL具塞试管中，各加蒸馏水约15 mL，5%硫酸溶液2.5 mL，50 g/L钼酸铵溶液2 mL，氯化亚锡-硫酸肼溶液0.5 mL，各管均加水补至25 mL，混匀。室温放置20 min后，以空白管作对照，测定660 nm处吸光度，样品总磷含量P%^[18]由（式I）计算，样品磷酸化取代度由（式II）进行计算^{[18, 19]}：

P%=[(m₁×V₀)/(m₀×V₁×10⁶)]×100   （式I）

式I：P%，样品中总磷含量；m₁，由标准曲线计算所得样品中磷的质量，μg；m₀，实验样品的质量，μg；V₀，样品液的定量体积，mL；V₁，用于测定的样品液的体积，mL。