1.3.2.2 超声波辅助提取黑枸杞花色苷
准确称取5 g黑枸杞粉末,置于100 mL离心管中,按料液比1:10比例加入70%乙醇后,利用柠檬酸调节溶液pH至3.0(±0.1),封紧离心管后锡箔纸包裹进行避光处理,200 W功率超声20 min后,4000 rpm转速冷冻离心20 min,取上层清液即得所需提取液。
1.3.2.3 黑枸杞花色苷结构检测
取50 mg黑枸杞果实粉末至1.5 mL离心管,进行超声辅助提取等一系列处理后离心,收集上清液。采用高效液相色谱-电喷雾质谱(HPLC-ESI-MS)对黑枸杞提取液中的花色苷进行分离和结构鉴定,对于色谱图中的9个色谱峰,根据其得到的全扫描质谱以及二级质谱图,可以得到相对应的结构信息。
1.3.2.4 黑枸杞花色苷提取含量的测定
利用pH示差法[8-9]测定花色苷含量,以矢车菊素葡萄糖苷为计量标准。将所得提取液分别用pH = 1.0 (0.2 mol/L KCl: 0.2 mol/L HCl=25:67, v/v) 和pH4.5 (0.2 mol/L Na Ac·3H2O:0.2 mol/L HAc=1:1, v/v) 缓冲液稀释[10], 混合均匀, 分别在恒温水30 min、20 min,(适当调整顺序)之后在波长525 nm和700 nm条件下测吸光度并记录。