1.2.6 bFGF 表达及其被糖基化程度的免疫荧光双标检测 创面组织冰冻切片, 经体积分数 0.1%Tri-ton X-100 的 TBS 漂洗后用 3%牛白蛋白封闭, 加特异性兔 源抗 bFGF 单抗 4℃过夜，漂洗后再滴加鼠源抗 AGEs 单抗 37℃孵育 1h。后与抗 兔源二抗-抗鼠源二抗-Rhod 于体积分数 0.1%Triton X-100 的 TBS 孵育 1h，DAPI 试剂对细胞核进行染色，用体积分数 0.1%Tri-ton X-100 的 TBS 洗 3 遍，甘油封 片后用免疫荧光显微镜检测。使用 Image Pro Plus 软件分析阳性结果。
1.2.7 Rg3 对 AGEs 干预后 HUVEC 细胞生长的影响 HUVEC 细胞的培养：将 HUVEC 细胞接种于 10%的 DMEM 培养基中，置于 37℃、5%CO2培养箱中，选 用对数生长期细胞。流式细胞仪定量测定凋亡或死亡细胞；在 6 孔板接种 HUVEC 细胞，待细胞贴壁后饥饿处理 24h 后，加入不同浓度的 AGE-HSA 和 Rg3 后继续 培养 6h 和 24h，消化收集细胞。分组：正常 HUVEC 细胞组；经饥饿处理 HUVEC 细胞组；AGE-HSA 干预 6h 组（分别加入 AGE-HSA 12.5、50、100μg）；AGE-HSA 干预 24h 组；Rg3 干预 6h 组（AGE-HSA 低、中、高剂量中分别加入 100umol 的 Rg3）；Rg3 干预 24h 组。按 AnnexinV Fitc 凋亡检测试剂盒说明书操作，流式细 胞仪测定，每孔检测 3 次。