利用养殖场污水分离鸡源粪肠球菌噬菌体
更新日期:2021-03-24     浏览次数:205
核心提示:1.8噬菌体噬菌谱的测定粪肠球菌,大肠杆菌,鸡肠球菌,小肠肠球菌,屎肠球菌,金黄色葡萄球菌,沙门氏菌分别接种到肉汤培养基培养过夜, 取50 L均匀涂

1.8噬菌体噬菌谱的测定

粪肠球菌,大肠杆菌,鸡肠球菌,小肠肠球菌,屎肠球菌,金黄色葡萄球菌,沙门氏菌分别接种到肉汤培养基培养过夜, 取50 μL均匀涂布至BHI琼脂培养基, 室温静置10 min,吸取1.5 μL噬菌体原液滴于平板上,正置于37 温箱中20 min,待噬菌体原液吸收后倒置, 培养10 h后观察有无噬菌斑[12]

1.9噬菌体浓缩及全基因组测序

100 ml噬菌体裂解液用0.22 µm微孔滤膜过滤后,向滤液中加入NaCl,终浓度为1 mol/l,混匀冰浴1 h,4 12000 rpmmin离心10 min,收集上清。目的是为了使噬菌体颗粒与细菌碎片分离。加入PEG60001 g/10ml),轻缓混匀,冰浴过夜,使噬菌体颗粒充分形成沉淀。次日,4 ,10000 rpm离心10 min回收噬菌体颗粒,弃上清,离心管倒置5 min,去除残余液体,此时,噬菌体颗粒附着于离心管内壁,用2 mlSM缓冲液重悬沉淀;加入等体积氯仿抽提宿主菌碎片和PEG:室温震荡30 s4 5000 rpm/min离心15 min后,回收含噬菌体水相,4 保存[13]

利用病毒DNA提取试剂盒将噬菌体浓缩液进行核酸提取,并用微量分光光度计对提取物进行浓度测量,浓度达到要求且电泳结果符合要求后,将提取物送至金唯智苏州实验室进行全基因组测序。