2.3 内皮细胞CD31和钙连蛋白免疫荧光染色

采用CD31和钙连蛋白免疫荧光染色鉴定分离的心脏微血管内皮细胞。细胞采用4%多聚甲醛固定5min，采用0.1%TritonX 通透后，采用8%羊血清封闭，采用抗CD31抗体和抗钙连蛋白抗体（1:100稀释）4℃孵育过夜，采用Alexa FluorH 488 羊抗小鼠和568羊抗兔二抗孵育1h，采用DAPI进行细胞核染色，荧光显微镜下观察。

2.4 Elisa检测促炎症细胞因子的释放

各组处理完毕后收集细胞，将细胞在含有RIPA的裂解液中裂解后在冰上放置10min，根据Elisa试剂盒配置标准蛋白，将样本和标准品加入酶标板中，在37℃孵育30min，洗涤后加入100μL酶结合物，洗涤后加入1μLTMD，15min后加入硫酸终止液，在酶标仪450nm处读取吸光度。根据标准品浓度制作标准曲线，计算各样本的浓度。