1.2.2巨噬细胞的培养

将得到的人来源单个核细胞加入5ml10% FBS的DMEM培养液,转移25cm²的细胞培养瓶中，置于37℃、5% CO2条件下培养，培养至2天，加入10μl20 ng/ml GM-CSF，每隔1-2天换培养基，培养至一周左右，待贴壁细胞长满瓶底70-80%，贴壁细胞为人来源巨噬细胞，10% FBS的DMEM培养液弃培养瓶中上清培养基，加入1mlPBS洗涤,弃上清PBS，加入1ml含EDTA的胰酶，消化1-2分钟，在荧光显微镜下观察细胞是否脱壁，可以轻拍细胞瓶底部加快细胞脱壁，加入1ml10% FBS的DMEM培养液中和胰酶，用枪头冲洗细胞瓶底部，将全部细胞悬浊液吸至15ml离心管，使用25℃，1000g条件离心10min，得到巨噬细胞沉淀。加入终浓度分别为25ng/ml、50ng/ml的结核分枝杆菌Hsp60刺激巨噬细胞。