1.4.1 实时荧光定量PCR

  各组培养一定时间后，应用总RNA提取试剂盒，提取各组hPDLSCs总RNA，再加入25uLLDEPC 水，反复进行吹打，加速溶解。应用分光光度仪（生产厂家：南京威美特科学仪器有限公司；型号：Q1-7230G）定量，选择反转录试剂盒，将总RNA反转录为cDNA，以cDNA为模板，进行PCR扩增。PCR扩增系：反应体系共为25uL，SYBR Green Mix 10uL上下引物均为5umol，cDNA模板1uL，ddH2O 4uL。PCR反应条件：于95℃环境下预变性5min，再在同等温度下变性10s，72℃条件下进行退化延伸30s，反复38次循环。将扩增产物放置1.5%琼脂糖凝胶上电泳，凝胶扫描，收集电泳照片，进行各扩增条带吸光度值测定。以GAPDH扩增条带吸光度值、目的基因扩增条带吸光度值比，进行OCN（骨钙素）、RUNX2、P2X7r、mRNA相对表达量计算。