四、Western blot检测细胞系中Dicer1表达

收集W12与S12细胞沉淀，RIPA 裂解液裂解细胞，冰浴 30min，裂解后12000r/min 离心，取上清提取细胞总蛋白，BCA 法测定蛋白浓度。配制 8% SDS-PAGE 凝胶，50μg 蛋白样品上样，SDS-PAGE 凝胶电泳，电泳后将蛋白转移至PVDF膜(聚偏二氟乙烯膜) 。Anti-Dicer1 抗体按1:500 稀释, GAPDH 抗体按 1 ∶ 1000 稀释; 辣根过氧化氢酶标记的兔抗鼠二抗按1 :1000 稀释。在 Bio-Rad 凝胶成像仪下电化学发光( ECL)试剂盒对 PVDF 膜进行图像采集与分析。

免疫组化法检测宫颈疾病组织中 Dicer1 表达 取宫颈疾病谱组织组合芯片CR602 和组织石蜡切片置烤箱 68℃拷片过夜，从环保脱蜡液至70%乙醇梯度脱水，0.01mol/L 柠檬酸缓冲液抗原修复。Anti- Dicer1 抗体(按1:100 稀释) 4℃孵育过夜; 按兔鼠通用组化试剂盒步骤操作，DAB显色 5min; 苏木素染核，中性树脂封片; 倒置相差显微镜观察 Dicer1 表达情况并评分。评分标准: 无着色0分、淡黄色1分、浅黄色2分、棕黄色3分和棕褐色4分。