1.2.2 HUCBSC细胞表型鉴定及标记：成功复苏HUCBSC细胞，将其以1×10⁶/ml接种于培养皿（60x15mm）中，培养于37℃、5%CO²培养箱内，加入低糖DMEM培养液进行培养，细胞每日换液一次，1周后待细胞贴壁良好，且铺满80-90%皿底后倒掉培养液，PBS冲洗3遍，拍照并同时记录贴壁干细胞的生长状态，以胰酶-EDTA消化液（0.25％）进行消化，边消化边显微镜镜下查看贴壁干细胞，细胞停止消化的指征为细胞之间间隙增大。无菌吸管反复吹打，贴壁干细胞脱落后将其悬液吸入备好的离心管中，离心3分钟（1000r/min），PBS液（2ml）稀释底层细胞，再次吹打均匀，之后移入EP管中，在每个EP管中加入CD34-单抗PE 10ul、CD45-单抗PE10ul，常温避光染色半小时。PBS液冲洗--加入1mlPBS--200目一次性尼龙膜--过滤细胞悬液--流式细胞仪检测CD45和CD34（细胞表面标志物）的表达，以确定细胞活性，Dil标记后备用。