3.2.2  山银花萃取物对酪氨酸酶抑制动力学分析

因山银花乙酸乙酯相对酪氨酸酶抑制效果最好，所以选择此相进行抑制动力学分析。以酶促反应速率倒数 1/ν为纵坐标，底物浓度倒数 1/S 为横坐标，不同质量浓度的山银花乙酸乙酯相所得到的抑酶方程线性关系良好。随着山银花乙酸乙酯相的质量浓度增大，直线斜率增大，且直线几乎相交于横轴的一点，最大反应速率V_max减小，米氏常数K_m基本不变，由此推断它对酪氨酸酶的抑制作用类型为非竞争抑制型。表明乙酸乙酯相和L-DOPA与酪氨酸酶分子的作用相互独立，即乙酸乙酯相萃取物既可以与游离酶结合，也可以与酶和 L-DOPA 的复合物结合，且结合常数相同。根据Lineweaver-Burk方程（表3.1）计算得乙酸乙酯相的K_m值约为5.91 mmol /L。然后以各直线与纵坐标的交点对山银花乙酸乙酯相质量浓度进行二次作图也可得到一条线性良好的直线，如图3.4（b），这表明山银花乙酸乙酯相萃取物对酪氨酸酶的抑制位点也是单一的或单一类型的位点。