1.3构建PD细胞模型

用终浓度为10µmol/L的RA处理细胞4d，使细胞形态从三角形诱导成长梭形；处理组分别更换含有50µmol/L 、100µmol/L 和150µmol/L 6-OHDA培养基，继续培养24h；细胞培养基更换为无血清的培养基，并设置不含细胞的空白对照，在培养箱继续孵育1h，用酶标仪检测450nm处的吸光值完成CCK8检测细胞存活率。

1.4检测细胞中P2X4受体表达

用RA进行细胞诱导，继之用不同浓度6-OHDA处理，胰酶消化并收集细胞后，分别进行Western blotting和mRNA水平的检测。在Western blotting检测中，先提取细胞总蛋白，将蛋白凝胶电泳后进行转膜，P2X4R抗体选择NC膜，封闭和孵育后采用化学发光法在蛋白凝胶成像系统下进行显影。在mRNA水平检测中，首先提取样品RNA并在超微量分光光度计上测定RNA浓度，记录A260/A280及A260/A230数值；RNA反转录后进行RT-PCR检测。