1.3 检测NIH-3T3细胞MDA含量以及NO含量

取生长状态良好的NIH-3T3细胞以2×10⁵/孔密度接种于6孔板，设置对照组和实验组，待细胞长满单层后，实验组细胞加入300μM H₂O₂处理2h后，分别加入裂解液裂解后收集细胞、离心吸取上清液作为样品待测。样品准备完毕后采用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，后续实验根据MDA检测试剂盒以及NO检测试剂盒进行操作，绘制标准曲线后测定细胞内单位蛋白的MDA含量以及NO含量。

1.4 免疫荧光法检测γH₂AX的表达

取处于对数生长期且生长状态良好的NIH-3T3细胞，将NIH-3T3细胞以2×10⁵/孔密度接种于细胞爬片上，待细胞长满单层后，实验组换为浓度为300μM的H₂O₂作用细胞2h，细胞经4%多聚甲醛室温下固定20min,PBS洗涤细胞三次，每次5min，0.2%Triton X-100通透10 min;再经2%BSA置于室温封闭1h，后用抗γH₂AX抗体4℃过夜孵育，PBST洗涤细胞三次，每次5min，荧光二抗室温下孵育45min，PBST再次洗涤细胞三次，每次5min，用DAPI孵育15min后封片固定，倒置荧光显微镜下观察。