iELISA方法具有最佳的敏感性和特异性
更新日期:2021-07-16     浏览次数:158
核心提示:2.2重组蛋白Ag5的构建表达以细粒棘球绦虫基因组DNA为模板,PCR扩增出目的条带,片段大小为1455bp,与预期结果相符合。融合表达载体pGEX-6P-2-Ag5构建

2.2 重组蛋白Ag5的构建表达

以细粒棘球绦虫基因组DNA为模板,PCR扩增出目的条带,片段大小为1455bp,与预期结果相符合。融合表达载体pGEX-6P-2-Ag5构建后经双酶切鉴定及测序分析无误后,转入XL-1blue,获得重组菌株。诱导表达获得Ag5/GST重组融合蛋白,PSP酶酶切Ag5/GST重组融合蛋白,酶切后目的蛋白经SDS-PAGE电泳,与预期目的蛋白分子量大小一致。

2.3 iELISA方法的建立及应用

利用Ag5抗原包被的iELISA方法对阴性和阳性血清样本进行检测,ROC分析显示,AUC(Area Under Curve)值为0.972,表明基于Ag5抗原建立的iELISA方法具有良好的检测性。进一步分析,当临界OD值为0.46时,该iELISA方法具有最佳的敏感性和特异性。