1.2.3 流加接种，分批补料培养

摇管接种后D3开始每天计数培养，直至细胞密度>40.0E6/mL，活率＞95%按计划接种。接种后按照实验条件流加、接种，统计对比各组细胞株生长状态、蛋白滴度及表达蛋白质量等差异。

1.2.4 生物反应器小试接种流加

根据摇瓶工艺优化数据进行反应器小试工艺验证，工艺验证阶段准备培养基、种子细胞，根据接种体积接入培养基及种子，反应器接种体积1.2L，下样终体积1.5L。接种温度设定36.5℃，后期培养过程中根据实验条件降温至34℃或持续恒温培养。每天取样计数、中控，根据每天葡萄糖消耗量，控制发酵液葡萄糖浓度1~1.5g/L。培养过程中手动加入消泡剂，消泡剂加入总量<50mg/L。Fed-Batch D15或细胞活率<70%结束培养，发酵液送下游纯化捕获，同时发酵过程D7开始每天送检ProteinA。