2.1 菌种培养及细菌基因组 DNA 提取

各阳性菌株经NB活化纯培养后平板培养基分离，挑取单个菌落于10 ml无菌试管中摇菌12 h,取1 ml细菌纯培养液，按通用型DNA提取试剂盒提取各细菌基因组DNA。用K5500超微量分光光度计测定各细菌DNA模板的浓度和纯度，并计算DNA拷贝数。DNA模板于-20 ℃下保存备用。

分别以目标菌株和供试菌株的基因组DNA为模板进行扩增。反应体系：2×M5 GoldStar TaqMan Mixture 10 μL，上下游引物各0.6 μL，探针0.4μL，DNA模板2μL，ddH₂O补足至20 μL。引物和探针浓度为10mMol/μL。反应参数：95 ℃预变性15 min；95 ℃变性3 s，60 ℃退火并延伸30 s，40个循环，在每个循环的退火延伸阶段收集荧光信号。以NB培养液为阴性对照，无菌超纯水为空白对照。