换液的目的是去除未贴壁细胞
更新日期:2021-07-29     浏览次数:231
核心提示:人外周血巨噬细胞的获得 取健康人和NSCLC患者的外周静脉血5-10ml,置于血常规抗凝管中,在超净台内进行操作,然后离心,吸去血浆,补充添加PBS,添加量

人外周血巨噬细胞的获得  取健康人和NSCLC患者的外周静脉血5-10ml,置于血常规抗凝管中,在超净台内进行操作,然后离心,吸去血浆,补充添加PBS,添加量为所弃去血浆体积的1.5-2倍,充分混合均匀,取离心管加入人外周血淋巴细胞分离液,分离液与样本体积为1:1,将经稀释处理的血液样本小心加于分离液液面上离心,可见离心管中液体分为四层,吸取第二层即白膜层,即为要获取的外周血单个核细胞(PBMC)。将获得的外周血单个核细胞加入5-10mlPBS缓冲液洗涤3,混匀、离心、弃上清,重复操作3次。1640培养基加入10%胎牛血清,用完全培养基调整细胞浓度, rhGM-CSF提前进行稀释分装,以100 ng/ml的浓度加入,接种于25cm2培养瓶内培养的细胞密度为1X106,接种于6孔板内培养的细胞密度为1X105。将细胞放入培养箱中,培养24h后进行全量换液,换液的目的是去除未贴壁细胞,2d全量换液,培养7d,获得成熟巨噬细胞。

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