1.6 三种 Tm 值测量方法参数设置与实验操作 三种方法的变温范围均为 20-95℃，变温速率均为 1℃/min。缓冲液条件均为 10 mM Hepes, pH 7.2、150 mM NaCl，样品浓度均在 0.5 mg/ml～0.7 mg/ml。三种 Tm 测量方法的样 品用量与试验时长信息。 差示扫描量热法：使用马尔文公司 VP-DSC 进行测定，首先在样品池中加入缓冲液重复 4 次变温程序以获得较准确的基线，再分别测定不同样品获得变温曲线。 圆二色光谱法： 使用英国应用光物理(Applied Photophysics Ltd)的 Chirascan plus 进行测 定。单点变温法：每个样品先进行 190-280nm 的波谱扫描，确定其 CD 信号最高或最低的波 长（即变温实验中变化最显著的波长），在该波长下进行变温扫描实时检测。多点变温法：抗体样品检测中使用了多点变温法，变温扫描过程中检测整个 205-250nm 波段的变化。单点变温数据数据采用 sigmoid 或者 double sigmoid 模型拟合, 选取 最优模型拟合结果，多点变温数据使用 global3 软件分析。