1.4 组织病理学检测及免疫组织化学染色

大鼠经尾静脉注射STZ溶液后常规喂饲16周。待观察期满，动物隔夜空腹，戊巴比妥钠（3%）麻醉下腹腔静脉取血及处死大鼠，迅速在冰上剥离海马组织，置于4%多聚甲醛中固定48 h，石蜡包埋后连续切片，每隔2张取1张切片，分别进行HE染色和BCI-2、Bax抗体免疫组织化学染色。免疫组织化学染色操作如下：切片脱蜡、水化、微波抗原修复（1 mol/L EDTA-Tris溶液）30 min，3 % H₂0₂室温孵育10 min，5 %山羊血清封闭非特异性抗原30 min。加入稀释的一抗（BCI-2、Bax抗体浓度均采用1：100）4℃孵育过夜后，用生物素标记的二抗（浓度为1：100）室温孵育20 min，洗涤切片后进行DAB显色。阴性对照以正常兔血清替代一抗，其余步骤同前。阳性反应为组织细胞内呈棕黄色染色。