1.2.6重组有机磷水解酶的活性测定
沙林标准曲线的绘制:称取100 ug/mL的GB标准液0、50、100、150、200、250,分别加入0.01 M PBS溶液至500μL,再依次加入125μL丙酮、125μL 0.5%联苯胺水溶液和500μL 0.25%过硼酸钠水溶液。测定406nm处的吸光值。
过-联苯胺定量法检测酶活:过硼酸钠在碱性水中分解出过氧化氢,过氧化氢与G类毒剂作用生成过氧膦酸,此过氧膦酸有强的氧化能力,能氧化联苯胺生成有色的偶氮燃料,并在波长406nm处有特异吸收峰,,检测样品在406nm处的吸光值,进而计算剩余GB的含量和酶的活性。
反应体系(1.25mL):0.01M PBS溶液稀释酶液使蛋白质浓度一致。取250μL稀释后酶液加入250μL 100 μg/mL沙林,室温反应5 min后,依次加入125μL丙酮、125μL 0.5%联苯胺水溶液和500μL 0.25%过硼酸钠水溶液。测定A406,计算剩余GB的含量和酶的活性。 将每分钟每1毫克蛋白酶降解的沙林毫克数定义为有机磷水解酶的酶活U。