测序分析构建的表达载体无突变现象
更新日期:2021-08-31     浏览次数:201
核心提示:2.2 PTP3的克隆与原核表达载体的鉴定以EHP基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得一条909bp左右的条带,大小符合预期。将扩增产物连接pMD19-T质粒并转化E.

2.2  PTP3的克隆与原核表达载体的鉴定

EHP基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得一条909bp左右的条带,大小符合预期。将扩增产物连接pMD19-T质粒并转化E. coli TOP10感受态细胞,对菌落PCR鉴定结果为阳性的菌落扩大培养并测序,结果表明克隆的PTP3与微孢子虫数据库中EHP PTP3序列一致,长度为909bp,且没有核苷酸突变,说明目的基因克隆成功。原核表达载体pET28a-PTP3经双酶切鉴定,获得5100bp左右的载体片段和909bp左右的目的基因片段,测序分析构建的表达载体无突变现象,与预期的核苷酸序列相符,说明原核表达载体pET28a-PTP3构建成功。