1.4.2主要实验试剂
磷脂酰肌醇激酶(PI3Kβ)抗体(bs-10657R)和蛋白激酶B(Akt)单克隆抗体(bsm-33325M)试剂盒均购自北京博奥森生物技术有限公司。PBS缓冲液(PH7.4-7.6):2000ml/袋规格的PBS粉剂,加入2000ml的蒸馏水,充分溶解。二抗检测系统为Dako公司通用型工作液。DAB显色剂(购自Dako公司):每毫升DAB稀释液中加入1滴DAB浓缩液。
1.4.3实验步骤
石蜡切片固定、脱水、包埋、切片,包埋后组织块经修整后,切片机切成2-4μm的石蜡带、将组织石蜡块在46℃温水中展片,粘附在防脱载玻片上、组织漂烘仪65℃烤片1-2小时、染色。
1.4.4结果判读
每份标本4张,其中2张分别进行2个指标的检测,一张做阴性对照,另外一张备用。行免疫组化时,每次染色均同步设阴性对照。显微图像结果分析:在光学显微镜下观察组织切片是否着色,根据染色程度及阳性细胞百分比判定结果 [2,3]。