1.2.3  Western blot 检测相关蛋白表达水平  将对数生长期的SKOV3细胞接种于6孔板中，培养24小时。根据Lip3000转染试剂说明书将miR-581mimics及miR-581NC转染进SKOV3细胞，48小时后提取细胞总蛋白,BCA 蛋白浓度测试盒测定并将样品调定至统一浓度,加蛋白上样缓冲液,沸水煮10min使蛋白变性,分装后于-80℃冰箱保存。取30μg总蛋白通过聚丙烯酰胺凝胶电泳, 电转移至NC膜,5%脱脂奶粉封闭1小时,分别加入用抗体稀释液稀释的特异性一抗LC3、Beclin1、FOXO1、GAPDH,4℃过夜。次日,用TBST洗涤3次,每次10min。放入二抗中，室温孵育1小时,用TBST再次洗涤3次,每次10min。ECL法显影，采用凝胶成像系统进行拍照，计算灰度值。以GAPDH为内参,观察各组检测蛋白的表达情况。