1.4.2间接ELISA反应条件优化

采用方阵滴定法，即取表达蛋白稀释成不同浓度后包被酶标板，以H6亚型标准阳性血清和阴性血清不同稀释度进行方阵滴定试验，测定OD₆₃₀值，计算P/N值确定最佳抗原包被浓度和血清稀释度；以最佳抗原包被浓度进行包被，以不同温度和不同时间进行孵育，按照上述步骤进行ELISA检测，测定OD₆₃₀值，计算P/N值确定最佳包被条件；以最佳抗原包被浓度和包被条件进行包被，以不同封闭液进行封闭2h，按照上述步骤进行ELISA检测，测定OD₆₃₀值，计算P/N值确定最佳封闭液；以上述最佳条件进行包被和封闭，开展酶标二抗浓度与最佳显色时间优化，确定间接ELISA检测方法的反应条件。