利用活化的农杆菌悬浮液浸染
更新日期:2021-09-15     浏览次数:178
核心提示:1.2.2 菊苣遗传转化利用活化的农杆菌悬浮液浸染10 min,将外植体转移到M1培养基[1/2MS+10 g/L蔗糖+0.01 mg/L 噻苯隆(TDZ)+1 mg/L生长素(IAA)],置于光

1.2.2 菊苣遗传转化

利用活化的农杆菌悬浮液浸染10 min,将外植体转移到M1培养基[1/2MS+10 g/L蔗糖+0.01 mg/L 噻苯隆(TDZ)+1 mg/L生长素(IAA)],置于光照培养箱[光照强度0.54~0.67 mmol·m-2·s-1,光培养16 h/d,暗培养8 h/d,相对湿度是60%,温度为(24±2)°C]共培养2 d。用含有100 mg·mL-1头孢霉素的无菌水清洗共培养的外植体2-3次,然后将外植体转移到M2[MS+10 g·L-1蔗糖+2 mg·mL-1苄氨基喋呤(6-BA)+1 mg·mL-1生长素(IAA)+3 mg·L-1潮霉素]培养基上培养至长出愈伤。将愈伤转移至M3(MS+10 g/L蔗糖+1 mg/L苄氨基喋呤(6-BA)+1 mg·L-1生长素(IAA)+3 mg·L-1潮霉素)培养基中,每7 d继代一次,直至绿芽长至2-5 cm。将再生植株从愈伤组织上切下,插入到M4[MS+10 g·L-1蔗糖+1 mg·L-1萘乙酸(NAA)+3 mg·L-1潮霉素]培养基中生根培养15-20 d,直到根系发育完成,炼苗3-4 d。将无菌苗移栽到泥炭土:蛭石=1:1的基质中。

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