1.3脾组织匀浆中H₂S的测定

清晨空腹抽肘静脉6 ml，所有患者均就诊时抽血，室温静止30min；手术切除的脾脏标本，取损伤的脾脏、正常脾脏组织碾碎；后3000转／分离心30min，吸取上清液，离心管密封后-80℃保存待测。待测样本统一编号保存，各项指标均统一标准，一批完成检测。

    待测样本中加入抗氧化液使H₂S、NaHS生成S^2-，然后采用敏感硫电极法进行测量，再根据标准曲线计算出H₂S的浓度^[1-2]。

1.4Western blot检测脾脏组织CBS和CSE蛋白的表达

    取损伤的脾脏、正常脾脏组织，液氮保存。取损伤的脾脏、正常脾脏冰冻标本0.5 g于RIPA裂解液中碾磨，以Bard-ford法测定蛋白浓度。取50 mg蛋白行SDS聚丙酰胺凝胶电泳，转膜2 h（0.65 mA/cm²）；预杂交室温3 h，加入单克隆兔抗人CBS（1:500）、CSE（1:250）、GAPDH（1:750）抗体，4 ^oC过夜。漂洗后加入辣根过氧化物酶标记的单克隆羊抗兔IgG II 抗，室温反应1.5 h，0.1% TBST洗膜，ECL发光压片显影。