核心提示:1.2.4WesternBlotting法检测蛋白的表达:将处于对数生长期的人肾小球系膜细胞接种于 6 孔板中,给予相应的处理后,用 RIPA裂解液裂解细胞并提取总蛋白
1.2.4WesternBlotting法检测蛋白的表达:将处于对数生长期的人肾小球系膜细胞接种于 6 孔板中,给予相应的处理后,用 RIPA裂解液裂解细胞并提取总蛋白,BCA法测定蛋白浓度, 12%十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),之后,转膜至 PVDF膜,5%脱脂奶 粉室温封闭 1h,4℃ 敷育一抗过夜,室温敷育二抗 1h,避光环境下用 ECL发光液于图像采 集仪内曝光成像。ImageJ软件分析各蛋白的相对表达量。 1.2.5统计学方法采用 Spss22软件完成,数据符合正态分布的计量资料以均数±标准差表示, 多组间比较用单因素方差分析,组间多重比较采用 LSD-t法。P<0.05为差异有统计学意义。