2 CRISPR-Cas系统分类及Cas12a的分类地位

CRISPR-Cas系统根据效应蛋白的组织结构被分为两大类，一类和二类^[7]。一类系统具有由多个Cas蛋白组成的多亚基效应复合物，而在二类系统中，效应复合物是一个单一的多结构域蛋白（图2）^[8]。一类系统主要根据不同的效应蛋白家族分为3个型（Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型）和12个亚型，第一类系统的重复通常是回文的。一类CRISPR-Cas系统在细菌和古细菌中最常见，占所有已鉴定的CRISPR-Cas位点的90%^[7]。

二类系统也被细分为3个型（Ⅱ、Ⅴ和Ⅵ型）。二类CRISPR-Cas系统包括剩下的10%，几乎只存在于细菌中，并组装成一个核糖核蛋白复合物，由一个CRISPR-RNA（crRNA）和一个Cas蛋白组成。Ⅱ型和Ⅴ-B型位点还包括tracRNA(反式激活CRISPR RNA)，它与重复序列部分互补，参与crRNA的加工和干扰。一些二类系统，特别是Ⅵ型，只包含一个CRISPR序列和一个效应蛋白^[8,9]。