1.2.1 DNA模板提取
收集培养好的菌丝，采用植物基因组DNA提取试剂盒（上海生工生物工程有限公司：后面简称上海生工）提取DNA模板，用1%的琼脂糖凝胶电泳检测DNA的质量，保存于-20℃冰箱中备用。
1.2.2 灵芝基因组ITS序列扩增
通过特异性引物ITS1（5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’）和ITS4（5’-TCCTCCGCTTATTGATATGG-3’）扩增ITS片段。25 μL PCR反应体系：12.5 μL2×Taq PCR Mix、0.5 μL ITS1 、0.5 μL ITS4、0.5μLDNA模板、ddH2O补齐。PCR扩增程序：94℃预变性4min，94℃变性30s，54℃退火30 s，72℃延伸50 s，循环33次，72℃补齐10 min，终止温度12℃[25]。PCR扩增产物交由上海生工进行测序。
1.3 数据处理
所测得的ITS序列使用Snap gene v5.5.3软件检查序列质量，手动检查峰图，人工校正后在NCBI数据库上BLAST比对分析，与GenBank中的ITS基因序列进行同源性比较，用MEGA Ⅹ软件对所得序列计算遗传距离，以邻接法(Neighbor-joining，NJ)构建系统发育树。
