1.3 免疫组化染色  

石蜡切片常规脱蜡、水化后，用免疫组化法(SP法)检测 S100A16蛋白的表达，具体操作流程按试剂盒说明书进行，光学显微镜观察组织标本着色程度。S100A16抗体购自Protein Tech公司(1:500稀释)。S100A16 蛋白定位于细胞膜、细胞浆及细胞核，呈棕黄色颗粒。采用Nikon digital camera(DXMl200F)400倍镜下采集图像，染色强度评分：0分（阴性），1分（1+），2分（2+），3分（3+）；染色阳性率评分：0分（阴性），1分（1-25%），2分（26%-50%），3分（51-75%），4分（76%-100%）。计算总评分=染色强度评分×染色阳性率评分，0-5分为S100A16低表达组，6-12分为S100A16高表达组。

1.4细胞培养

人食管鳞癌细胞株TE12培养在含有10%胎牛血清（FBS）的RPMI1640培养基，放置体积分数5%CO₂、37℃细胞培养箱中常规培养，每1～2d更换新鲜培养基，当细胞融合度达80%～90%时进行传代培养。