1.4 噬菌体分离与纯化

   将采集自甘肃省多个污水处理厂的4℃保存的污水，放置入100ml锥形瓶中，按1:1比例加入SM缓冲液和LB液体培养基，同时加入1%对数生长期宿主菌混合均匀，37℃，200r/min 过夜培养。培养液经8000 rpm 离心10min后，将获得的上清液经0.22um无菌微孔滤膜除菌，4℃保存备用。采用双层平板法分离噬菌体。用SM缓冲液10倍梯度稀释噬菌体原液，与宿主菌悬液100ul 等量混合，放置37℃恒温培养箱15min，再与冷却后的半固体培养基混合均匀，倒入LB固体培养基中，置于37℃恒温培养箱中过夜培养，观察有无噬菌斑。噬菌体的纯化参照文献^[19]，分别用巴氏吸管吸取单个噬菌斑置于SM缓冲液中，室温静置4h。再取混合液10倍梯度稀释后，制备双层培养基，观察平板上噬菌斑的特征。重复7-9次，直至双层平板出现大小均一、透明度高的噬菌斑。