核心提示:最新的研究成果,本论文的主要观点为目的:建立人降钙素原(PCT)原核表达体系,高效表达与纯化可溶性PCT重组蛋白纯品。 方法:人工合成PCT蛋白密码子
最新的研究成果,本论文的主要观点为目的:建立人降钙素原(PCT)原核表达体系,高效表达与纯化可溶性PCT重组蛋白纯品。 方法:人工合成PCT蛋白密码子优化序列,克隆至带麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的pRSF-Duet载体以构建pMBP-PCT-pRSF表达质粒。在E。 coli BL21(DE3) pLysS表达菌株中诱导表达。SDS-PAGE电泳鉴定亲和纯化所得蛋白的分子量及纯度,生物梅里埃VIDAS全自动荧光免疫分析仪检测浓度及稳定性。 结果:重组pMBP-PCT-pRSF表达质粒成功构建及表达,浓度可达168 mg/L,纯度可达95%。在4 ℃和-20 ℃储存64周,期间多阶段抽样检测,PCT重组蛋白浓度稳定,均在允许相对偏差5%以内。 结论:利用密码子优化,成功构建了PCT重组蛋白的高效原核表达体系,蛋白纯品浓度为168 mg/L、纯度为95%,低温储存64周后降解率低于5%,可充分满足临床实验室参考物质的需