测定酶液在不同温度下孵育不同时间以的残余酶活力
更新日期:2021-12-02     浏览次数:216
核心提示:1.1.1热稳定性分析实验室前期研究发现,浓度为1.2 M的山梨醇是-L-鼠李糖苷酶酶活力增强的关键拐点,也是其酶活力的最大峰值处。为了研究山梨醇对-L-鼠

1.1.1 热稳定性分析

实验室前期研究发现,浓度为1.2 M的山梨醇是α-L-鼠李糖苷酶酶活力增强的关键拐点,也是其酶活力的最大峰值处。为了研究山梨醇对α-L-鼠李糖苷酶热稳定性的具体影响,我们分别测定并绘制了添加1.2 M 山梨醇后α-L-鼠李糖苷酶的热稳定性曲线与热失活曲线的一级动力学模型。

热稳定性曲线:山梨醇添加组(1.2 M)和不添加组分别于60 ℃、65 ℃、70 ℃、75 ℃、80 ℃孵育10 min,测定残余酶活力,绘制热稳定性曲线。

热失活曲线的一级动力学模型:根据热稳定性实验结果,选取合适温度,测定酶液在不同温度下孵育不同时间以的残余酶活力,以ln (残余酶活力)作图,并进行线性拟合,绘制热失活曲线的一级动力学模型。得到的线性斜率即为该温度下的一级失活常数(Kd),由一级失活常数可计算出该温度下的半衰期(t1/2)。