1.1 cox1 基因扩增与测序

根据文献，以虫体DNA为模板扩增其线粒体COX1基因序列片段^[12]。

反应程序为：预变性94℃，3min；变性98℃，10s，退火55℃，30s，延伸温度为72℃，1min，共35个循环；后延伸温度为72℃，5min、4℃保存。

取5μl PCR 产物直接加于点样孔中，用Good View Nucleic Acid Stain染色，于1%的TAE中琼脂糖凝胶电泳30min，将凝胶置于紫外投射仪下观察结果，凝胶成像系统摄像。切取目标条带通过胶回收纯化后将扩增产物克隆到pMD18-T载体上，用蓝白菌落筛选法鉴定阳性克隆。PCR进一步证实。然后送由北京六合华达基因科技有限公司对阳性克隆进行测序。

1.2 西藏绵羊阴茎骆驼圆线虫分离株线粒体 cox1 基因序列分析

利用DNAMANV6软件对cox1基因测序结果进行序列分析，并与Genbank中同种线虫和其他线虫进行种内和种间比对。利用Mega7.0软件中的邻位相连法（Neighbor-Joining，NJ）反复运算1000次，选取最佳模型，绘制种系进化树。