1.3.4 EAHB的细胞定位^[11]

将对数生长期的HT-29细胞，以20,000个/孔（细胞浓度为2×10⁴ 个/mL，1 mL/孔）接种于附有盖玻片的6孔板中，在37 ℃，5 % CO₂的培养箱中培养过夜。弃去上清培养液，严格避光的条件下，在6孔板中加入PBS缓冲液稀释配制的浓度为5 μmol/L的EAHB工作液，在5 % CO₂培养箱中37 ℃避光孵育60 min。弃掉上清，用PBS缓冲液洗3遍，分别用2.5 nmol/L的溶酶体荧光探针Lyso-Tracker Green、线粒体荧光探针Mito-Tracker Green、内质网荧光探针ER-Tracker Green和细胞核荧光探针Hoechst 33342孵育细胞15 min，每组设置3个平行孔。激光共聚焦显微镜下观察EAHB在细胞内的分布情况。