1.2.1 纤维素酶产生菌的筛选 富集培养:称取5.0 g土样置于45 mL生理盐水中,加入无菌玻璃珠充分振荡混匀,用滤纸过滤除去固体杂质,即得样品液。取每种样品液1.0 mL加入到盛有30 mL富集培养基的250 mL锥形瓶中,置于45 ℃、150 r/min的恒温摇床中培养5 d,得到第一代菌群。取1.0 mL一代菌液转入30 mL新鲜富集培养基中,在45 ℃、150 r/min的条件下继续培养5 d,得到第二代菌群,相同条件下重复富集培养8轮,得到热稳定性纤维素酶产生菌群。
初筛培养:将富集后的培养液进行梯度稀释至10-5~10-7倍,分别取0.1 mL涂布于平板筛选培养基,45 ℃培养4~5 d后,往培养皿中加入1 mg/mL的刚果红染色液浸泡45 min,倒掉染色液,然后加入适量的1.0 mol/L NaCl溶液脱色45 min。根据菌落水解圈直径(D)与菌落直径(d)之比值越大,该菌株产纤维素酶能力越强[9]。挑取D/d值较大且生长迅速的菌落进行划线分离,直到获得纯培养,编号,保存备用。