1.2.1外植体灭菌与接种 将较长的匍匐茎剪成3-5cm的小断,每断至少带有一个侧芽。先用75%的酒精浸泡2-3min,然后转入0.1%的氯化汞溶液中灭菌15min,最后取出用无菌水漂洗3-4次。接着剥掉茎尖外面的幼叶和鳞片,露出生长点,切取长度适中并带有侧芽或顶芽的茎段接种于MS培养基[11],每个培养瓶接种3株。
1.2.2继代培养与生根培养 待初代培养新生幼芽生长至3-5cm长时将幼芽剪下转接入不定芽增殖培养基继代培养。采用6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)、奈乙酸(NAA)和2, 4-二氯苯氧乙酸(2, 4-D)和蔗糖浓度等4因素3水平正交试验设计L9(34)诱导不定芽增殖,每个月继代一次。观察幼苗生长状况,并统计每次继续代培养繁殖系数。根据草莓种植季节,在移栽前1个月将幼芽转入诱导生根培养基。以培养基中无机盐浓度、6-BA、NAA和蔗糖浓度4因素设计3水平正交试验L9(34),在(25±2)℃、光照14 h/d、光强2 000 lx条件下培养,接种30d后统计生根数量,并测量根长。