1.3.1 Treg细胞检测 清晨空腹静脉采血约2ml,置于EDTA抗凝管。每个标本取1只干净的试管,试管内加入20μl的单抗CD4 CD25和CD127,再加入50μl的全血,震荡混匀后避光孵育15分钟,加入500μl的BD溶血剂,震荡混匀后,避光孵育10分钟,1500转离心 5分钟,弃上清,加入1mlPBS清洗后1500转离心 5分钟,弃上清,再次加入600μlPBS重悬细胞。采用流式细胞仪检测,并用 Flowjo 软件分析处理。
1.3.2 IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ、IL-17A检测 清晨空腹静脉采血约2ml,置于EDTA抗凝管。每个标本取1只干净的试管,试管内加入 25μl孵育好的捕获微球,再加入 25μl 荧光检测试剂,震荡混匀后,室温避光孵育2.5小时,加入1mlPBS清洗后1500转离心 5分钟,弃上清,加入 100μlPBS 溶液重悬细胞。采用流式细胞仪检测,并用 Flowjo 软件分析处理。