2. 双向电泳分析 

第一向等电聚焦(IEF)，分别取脱脂牛羊乳及牛羊乳清冻干粉20mg，各加入200µL再水化液RB(7 mol／L尿素、4％CHAPs、2mol/L硫脲，双蒸水溶解)充分混合溶解，在4℃下12000r/min离心20min取上清液（即为样品液），用考马斯亮蓝染色法定量测定。IEF采用固相pH梯度干胶条，根据蛋白质定量结果取样，硝酸银染色的分析胶上样量为40µg，而考马斯亮蓝染色的质谱胶上样量为500µg。上样液的成分为：样品液、1%IPG缓冲液、1%DTT、1×溴酚蓝缓冲液、RB至460µL^[15]。室温20℃泡胀过夜（10~12 h），使胶条完全吸收上样液。等电聚焦程序^[16]为：300V 0:30Hr，500V 1:00Hr，1000V 1:00Hr，8000V 3:00Hr，8000V 5:20Hr，聚焦电压：58KVh。