1.1.1. LM928 EⅡ基因缺失株的构建  按照李红欢^[11]方法制备LM928感受态细胞。分别取20 μL pKSV7-ΔEⅡA、pKSV7-ΔEⅡB和pKSV7-ΔEⅡC重组质粒加入至100 μL LM928感受态细胞中轻缓吹打混匀，后在2.5kv、5ms条件下进行电击转化。电击转化后分别将转化产物涂布于含氯霉素（0.01g/L）的BHI固体培养基上，30℃静置培养36-48h后用PCR筛选阳性转化子。将阳性转化子置于氯霉素和42℃双重压力下实现同源重组。将其置于30℃无抗性的BHI液体培养基中传20代，并将末代菌液接种于有无氯霉素的BHI固体培养基上，筛选出只在无氯霉素的培养基上生长的菌株，用vΔEⅡA 、vΔEⅡB和vΔEⅡC引物进行PCR验证和测序鉴定。将构建成功的基因缺失株分别命名为LM928ΔEⅡA、LM928ΔEⅡB和LM928ΔEⅡC。