原核表达菌株BL21(DE3)/pET28a-fiber-2由本实验室构建和保存，fiber-2基因经过适当裁剪，删除了N端的274个氨基酸残基^[8]。利用SWISS-Model在线工具对fiber-2进行蛋白结构的预测和分析，并利用PyMol软件对其空间结构进行展示。

该菌种在37 °C培养至OD₆₀₀为1.0时，加入终浓度为30 mmol/L的乳糖，调整诱导温度为32 °C，诱导时长为12 h。离心收集菌体后，用PBS重悬，进行超声波破碎；离心分离上清后，用Ni Sepharose 6 FF介质进行亲和层析纯化。利用BCA试剂盒进行蛋白含量测定；并利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）技术对蛋白进行分析。

用PBS将纯化的fiber-2蛋白稀释至0.4 mg/mL，加入3倍体积的ISA 71VG油佐剂，使用高速剪切机对其充分乳化。该疫苗即为fiber-2亚单位疫苗。

1.4  蛋鸡免疫

对150日龄产蛋母鸡进行三次免疫：首次皮下免疫1 mL的fiber-2亚单位疫苗；首次免疫后14天和28天进行两次加强免疫，免疫剂量为2 mL。三免30天后，收集免疫鸡所产鸡蛋，表面酒精消毒后，置于4 °C保存。