参考Genbank登录的ASFV基因序列(MK333180.1),选取p72蛋白的部分基因,由生工生物工程(上海)股份有限公司合成ASFV-p72基因并插入pET28a载体,命名为pET28a-p72质粒。
根据合成的基因设计引物,N端添加Kozak起始序列、C端引入6×His标签,两端分别添加酶切位点BamHI和EcoRI,引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成,扩增片段长度为519 bp。
以合成的pET28a-p72质粒为模板,p72F/p72R为引物,进行p72基因的扩增。将PCR扩增得到的p72基因定向插入至杆状病毒表达载体PYBDM的PH启动子下游,命名为PYBDM-IM-p72,用BamHI、EcoRI进行双酶切鉴定,并送至生物工程(上海)股份有限公司进行测序鉴定。