将0.1%的木瓜蛋白酶溶液置于超声波清洗机内,一起放置于恒温培养箱中,确保本实验在20±0.1℃的条件下进行。
1.3.2 测定木瓜蛋白酶活力
根据张新灿[11]等的方法,略作修改。准确移取0.2mL木瓜蛋白酶液及2.2mL1g/100mL酪蛋白,在0.1M的三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲溶液(pH8.5)中均匀混合,40℃恒温水浴锅中反应20min,立即加入3.6 mL、10%的三氯乙酸溶液。以在木瓜蛋白酶液与酪蛋白底物混合之前加入三氯乙酸作为空白。反应结束后,将混合液于6570 x g离心力下离心20min,取上清液,测定其280nm处的吸光值。根据酪氨酸标准曲线和测定的吸光度值,计算反应液中酪氨酸含量。木瓜蛋白酶活力可用1mL木瓜蛋白酶液在一分钟内分解酪蛋白后的酪氨酸含量表示,单位为U/mL。