间接观察单克隆形成情况
更新日期:2022-05-20     浏览次数:131
核心提示:1.2.3平板克隆实验调整对数生长期HeLa细胞的密度后接种至24孔板。据分组进行药物处理后用胰蛋白酶消化,调整细胞悬液浓度(200 cells/孔)接种于24孔

1.2.3平板克隆实验

调整对数生长期HeLa细胞的密度后接种至24孔板。据分组进行药物处理后用胰蛋白酶消化,调整细胞悬液浓度(200 cells/孔)接种于24孔板。培养7d,冲洗后用结晶紫染色拍照并观察细胞团,间接观察单克隆形成情况。

1.2.4 流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期

取对数生长期的HeLa细胞调整密度后分别接种至6孔板。分组药物处理后,置于37℃,5% CO2分别培养24 h、48 h和72 h后,胰酶消化后收集下层细胞沉淀。洗涤细胞加入300 µL的1*Binding Buffer悬浮细胞。加入10 µL的Annexin V-FITC和5 µL的PI染色混匀后,避光室温孵育15 min。使用流式细胞仪检测。

1.2.5 Transwell检测细胞侵袭能力

将稀释的Matrigel取 25μl加入transwell 板上室,37℃放置30 min使Matrigel聚合成胶。Transwell 培养板上室加入100 μl 细胞悬液(5×104 )并加入培养基200 μl,分组刺激细胞。Transwell 培养板下室加入1 ml 趋化因子,培养24 h。擦去Matrigel 凝胶和表面细胞。取出上室,预冷甲醇固定30 min结晶紫染色10 min。处理后显微镜观察记录。