1.1.1 试验样品
2020年11月上旬在甘肃省临夏市清源屠宰场选取健康的成年雌牦牛,将其颈动脉放血处理死后迅速解剖,采集牦牛卵巢组织,将卵巢表面凸出的卵泡按直径进行划分,不同直径大小卵泡的划分参考于永生等[16]的操作方法,依次分为小卵泡(2~4 mm)、中卵泡(4~6 mm)、大卵泡(6~8 mm)、超大卵泡(>8 mm),无菌生理盐水中冲洗干净后,一部分用无菌注射器针头抽取,将抽取的卵泡液装入无菌离心管中做好标记,用锡箔纸包裹后放入布袋中,迅速投入液氮中带回实验室,存于-80℃冰箱备用;另一部分将分离的卵泡用4 %多聚甲醛固定后带回实验室,存于4℃冰箱中备用,上述操作保证在30 min内完成。