HT22细胞用含10%胎牛血清和1%青链霉素的DMEM高糖培养基在37℃、5% CO2的培养箱中培养。间隔一天进行换液,当细胞密度生长到百分之八十左右时,用0.025%的胰酶消化1分钟,然后用培养基重悬后可进行传代或铺板以备后续实验使用。实验组为NC组(阴性对照组:未建模,未加药处理)、OGD/R组、OGD/R+低浓度药物组、OGD/R+中浓度药物组、OGD/R+高浓度药物组。
2.2 OGD模型建立
取状态良好的HT22细胞种于6孔板中(2*106个/孔)。在进行OGD模型前,将接种细胞的孔板用PBS洗3次后加入无糖DMEM培养基,随后培养于缺氧培养箱中(95% N2、5% CO2和1%O2)5小时。造成OGD损伤后,将细胞取出,替换成完全培养基并置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中,待复氧24小时后可进行后续实验。加药组细胞在OGD前,用不同浓度的药物孵育12小时后再建立OGD/R模型。