选用SD品系雄性大鼠（8-10周龄）20只，分为正常重力组（weight-bearing）和后肢悬吊组（hindlimb unloading, HU）。每只大鼠尾根部1/3处用医用胶带固定。HU组大鼠将医用胶带将后肢悬空并固定于鼠笼上，后肢悬空，与地面呈45度角，WB组大鼠后肢着地。HU组及WB组大鼠均正常饮食饮食。每天检查1次鼠尾以防缺血坏死。分别在造模7天和28天时取WB及HU组大鼠胫骨，制备石蜡切片，用于骨组织学检测。

1.3 骨组织切片制备及组织学检测

大鼠胫骨剥离结蹄组织后，以4%多聚甲醛固定24h，再经12.5% EDTA脱钙3个月。骨组织石蜡包按常规操作处理，并制备6μm石蜡切片。切片脱蜡至水后，以苏木素-伊红（H&E）染色，显微镜下观察骨组织学形态并拍照。

1.4 Piezo1免疫组化

按照方法1.3制备骨组织石蜡切片标本。切片脱蜡至水后以0.4%的胃蛋白酶37℃孵育30min进行抗原修复，并按照常规方法进行Piezo1的免疫组化染色。抗Piezo1抗体（1:100），4℃孵育过夜，洗涤3次后以HRP-标记二抗室温孵育1h，随后进行DAB显色。