2.2煤中汞浸出微生物筛选与鉴定

从煤样品取样点表层土壤取回样品，称取1g土壤样品，加入无菌生理盐水，配置出10^-2、10^-3、10^-4、10^-5等一系列的稀释菌液，然后用移液枪吸取各浓度稀释液0.1mL，接种在PDA（HB0233-12，海博生物）固体培养基上，在无菌操作台上涂布后在恒温培养箱30℃中培养，每隔2天观察一次菌落生长情况。通过平板划线法对土壤稀释液中的微生物不断进行稀释分离，最终得到形态统一且独立分布的单菌落。配置好PDA平板上分别撒入0.3g煤样品，每隔2d观察煤的转化效果，根据文献记录^[22]，平板上形成的黑色液滴越多，表明其转化效果越明显。将产生黑色液滴菌株残煤从平板上收集并用去离子水反复冲洗，用自动测汞仪直接测定残煤中汞含量。通过富集分离筛选到一株对煤转化效果和汞的浸出率较好菌株M-3，将纯化菌株送上海生工进行菌种分子生物学鉴定。